产品货号：
BTN14-26800
中文名称：
隐孢子虫荧光定量PCR试剂盒(染料法)
英文名称：
Cryptosporidium spp. qPCR Kit(SYBR)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本产品是根据隐孢子虫rRNA编码基因的保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量PCR产品。
隐孢子虫(Cryptosporidium)为体积微小的球虫类寄生虫，广泛存在多种脊椎动物体内，寄生于人和大多数哺乳动物的主要为微小隐孢子虫(C.parvum)，引起隐孢子虫病(cryptosporidiosis)，是一种以腹泻为主要临床表现的人畜共患性原虫病，因此对隐孢子虫进行快速灵敏的诊断具有重要的意义。
保存：-20℃，有效期一年。
一、样品DNA的制备
二、引物的制备(在样品制备室进行)
三、稀释阳性对照(以102～107这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的长为150bp的DNA片段作为阳性对照。
四、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
五、数据处理
相关搜索：隐孢子虫荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Cryptosporidium spp. qPCR Kit(SYBR)
隐孢子虫(Cryptosporidium)为体积微小的球虫类寄生虫，广泛存在多种脊椎动物体内，寄生于人和大多数哺乳动物的主要为微小隐孢子虫(C.parvum)，引起隐孢子虫病(cryptosporidiosis)，是一种以腹泻为主要临床表现的人畜共患性原虫病，因此对隐孢子虫进行快速灵敏的诊断具有重要的意义。
- 根据隐孢子虫OWP(oocyst wall protein)编码基因保守序列设计的专一性引物，与其他肠道疾病病原体(如B.hominis、E.coli、E.dispar、E.moshkovskii、V.cholerae等)无交叉反应。
- 灵敏度比常规PCR高2～3个数量级，可以达到几十拷贝/反应。
- 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
- 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
- 本试剂盒足够100次20μL反应体系的荧光定量PCR。
- 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
| 组分 | 规格 |
| 2×qPCR MagicMix | 0.5mL(装A袋) |
| 超纯水 | 1mL(装A袋) |
| 隐孢子虫PCR引物F | 0.5 OD(装B袋) |
| 隐孢子虫PCR引物R | 0.5 OD(装B袋) |
| 隐孢子虫基因阳性对照(1×108 copy/μL) | 50μL(装C袋) |
保存：-20℃，有效期一年。
一、样品DNA的制备
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数原虫DNA提取试剂盒兼容。本公司的柱式粪便DNA提取试剂盒也可以用于隐孢子虫DNA提取。
二、引物的制备(在样品制备室进行)
- 按引物标签提示在装引物干粉的管中直接加入适量的超纯水(加入量见引物试管上的标签)，使得两条引物的浓度均为10μM(10pmol/μL)，然后各取110μL混合在一起得220μL，标注为引物混合物，放冰上待用。220μL足够100次qPCR反应。
三、稀释阳性对照(以102～107这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的长为150bp的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL超纯水(最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，从6号管中取5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，从5号管中取5μL 1×105拷贝/μL的阳性对照到4号管中，得1×104拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
四、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 在PCR管中加入下列成分(待测样品需要做三次重复，下表只列出一次。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
注：仅ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照，其他荧光PCR仪器(如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000和LightCycler480)不需要使用ROX。成分 样品 阴性对照 阳性对照(2～7管) 2×qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 引物混合物 2μL 2μL 各2μL 自备10×ROX(见注) 2μL 2μL 各2μL 待测样品DNA模板 1～5μL 不加 不加 阳性对照(2～7号) 不加 不加 各5μL 补水到 20μL 20μL 20μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。
过程 温度 时间 预变性 95℃ 3分钟 PCR反应
(45个循环)95℃ 30秒 55℃ 30秒 72℃ 30秒 - 数据采集具体操作按所用仪器推荐的流程进行。一般在复性步骤采集荧光数据。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。
五、数据处理
- 以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
相关搜索：隐孢子虫荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Cryptosporidium spp. qPCR Kit(SYBR)